㈠ lipo2000使用前怎样离心
博凌科为解这应该是一种贴壁细胞，先按说明书提供的比例计算要用的lipofectamine 2000和DNA的量，分别用无血清培养液稀释lipofectamine 2000和要转染的DNA，按说明书要求的时间混合两种稀释液，在等待的时间里用无血清培养液洗2两遍细胞，加。
㈡ 转染时间如何计算以lipo2000为例，是从加入lipo的时间点开始算起，还是从弃去lipo换成普通的培养基开始算
加入lipo开始计算，换成普通培养基就算结束了，因为换液你都倒掉病毒或质粒了。有问题加我就行
㈢ lipo2000转染细胞对质粒浓度有要求吗
转染细胞的质粒最好是去内毒素的，纯度较高的质粒。在这个前提下，浓度越高越好。
㈣ 使用Lipo 2000和lipo RNAIMAX 进行转染，看不到任何荧光。
24h去看荧光判断转染效率的,我觉得时间太长了，时间过长容易造成荧光的猝灭，一般我们实验室在做完BIODAI,SIRNA转染后都会在6h小时先观察荧光情况，最后转染后48h收细胞做qPCR基因水平检测，也有很多实验室转染后72h收细胞提蛋白做western
Blotting蛋白水平检测。
㈤ lipo2000转染后必须换液吗
炼钢过程中钢液从炉气中吸收氢
钢液中氢的溶解度随温度升高而提高,在缓慢凝固条件下,氢以针孔形态析出.快速凝固时,析出氢在铁的晶格内造成高应力状态,导致脆性.
N:
炼钢过程中钢液从炉气中吸收氮
1、 钢液中溶解的氮在凝固过程中因溶解度降低而析出,并与钢中的Si、Al、Zr等元素化合,生成SiN、AlN 、ZrN等氮化物.少量氮化物能细化钢的晶粒.氮休物多时,会使钢的塑性和韧性降低.
2、 氮属于扩大奥氏体区元素,在钢中可部分代替镍的作用,是铬锰氮不锈钢中的合金元素,在超低碳不锈钢中,可代替碳的作用,提高钢的强度.
O:
1、 钢液中溶解的FeO 在凝固前温度降低过程中与钢液中的碳起反应,生成一氧化碳气泡,在铸件中造成气孔.
2、 钢液凝固过程中,FeO因溶解度下降而析出在钢的晶粒周界处,降低钢的性能.
㈥ 用lipo2000转染4h后的换液需要pbs洗吗
那就要看实验要求严不严了。 需要将细胞用作他途，比如拿去做转染、提蛋白等，这就需要将细胞用PBS清洗，但也不是必须，得看情况。一般细胞换液，可以不用PBS清洗。
㈦ 磷酸钙法转染和LIPO2000一样吗，
这是两种转染方法
磷酸钙法：原理是形成磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞；
LIPO2000：实质是阳离子脂质体法，原理是带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞
㈧ 转染试剂lipo2000和oligo有什么区别
oligo的转染还是属于DNA转染，由于分子小，转染的问题主要是转染后的稳定性。
脂质体的转染毒性是最大的，很明显，那么多的细胞死亡是由于转染的细胞毒性导致的。对于这一点我有两个建议，一个是减少DNA的用量，我一般做转染，对于任何细胞，只要是24孔板，一般都是用1ugDNA，这个量绝对够了,设置RFCET2ul,3ul,4ul三个梯度，每个梯度最好做2个复孔,DNA 和RFECT的比例是1:2-1:3，因为质粒转染进入细胞的本质，和病毒感染没区别，质粒的各种元件会从宿主细胞内抢夺细胞机器大量开始转录翻译你的目的蛋白，在这个过程中会产生大量的没有正确折叠蛋白
㈨ 10cm细胞培养皿可以做siRNA干扰吗，需要多大量的siRNA和lipo 2000呢
当然可以啊，要多少lipo2000是根据细胞种类来看的，有些细胞对lipo2000毒性的耐受力差，就不能多用。我知道的HEK 293细胞一般可以用到30ul的lipo2000，而siRNA的用量一般是1ug/1ul lipo2000.
㈩ 请教，关于lipo2000转染效率低下的原因探讨
脂质体的转染毒性是最大的，很明显，那么多的细胞死亡是由于转染的细胞毒性导致的。对于这一点我有两个建议，一个是减少DNA的用量，我一般做转染，对于任何细胞，只要是12孔板，一般都是用1ugDNA，这个量绝对够了。,因为质粒转染进入细胞的本质，和病毒感染没区别，质粒的各种元件会从宿主细胞内抢夺细胞机器大量开始转录翻译你的目的蛋白，在这个过程中会产生大量的没有正确折叠蛋白，这些异常折叠蛋白进一步引起ER stress导致细胞凋亡。因此你用DNA太多，本身就有细胞毒性。另外就是脂质体本身的毒性。事实上，对于293系的细胞系，最好用的是PEI这种东西。毒性小，转染效率高，一般对293系列的细胞系可以轻易达到80%。polyscience有粉末买，买回来后直接在分子纯度的水里配置成1ug/uL的溶液，和你的质粒按照1ug DNA/6ug PEI对293进行转染。
而且直接使用自制的PEI非常便宜，在293上远比商品化的脂质体要好。
另外，如果你们实验室确实钱多，不怕花钱，建议你取用Promega的FugenHD,那个转染效率比脂质体更好，而且毒性小，至于价格。。。。。。。。。。。也更高。。。。。。。。。
另外，你说漂浮的细胞有表到GFP，那个不一定是真的GFP，很多时候