㈠ lipo2000使用前怎樣離心
博凌科為解這應該是一種貼壁細胞，先按說明書提供的比例計算要用的lipofectamine 2000和DNA的量，分別用無血清培養液稀釋lipofectamine 2000和要轉染的DNA，按說明書要求的時間混合兩種稀釋液，在等待的時間里用無血清培養液洗2兩遍細胞，加。
㈡ 轉染時間如何計算以lipo2000為例，是從加入lipo的時間點開始算起，還是從棄去lipo換成普通的培養基開始算
加入lipo開始計算，換成普通培養基就算結束了，因為換液你都倒掉病毒或質粒了。有問題加我就行
㈢ lipo2000轉染細胞對質粒濃度有要求嗎
轉染細胞的質粒最好是去內毒素的，純度較高的質粒。在這個前提下，濃度越高越好。
㈣ 使用Lipo 2000和lipo RNAIMAX 進行轉染，看不到任何熒光。
24h去看熒光判斷轉染效率的,我覺得時間太長了，時間過長容易造成熒光的猝滅，一般我們實驗室在做完BIODAI,SIRNA轉染後都會在6h小時先觀察熒光情況，最後轉染後48h收細胞做qPCR基因水平檢測，也有很多實驗室轉染後72h收細胞提蛋白做western
Blotting蛋白水平檢測。
㈤ lipo2000轉染後必須換液嗎
煉鋼過程中鋼液從爐氣中吸收氫
鋼液中氫的溶解度隨溫度升高而提高,在緩慢凝固條件下,氫以針孔形態析出.快速凝固時,析出氫在鐵的晶格內造成高應力狀態,導致脆性.
N:
煉鋼過程中鋼液從爐氣中吸收氮
1、 鋼液中溶解的氮在凝固過程中因溶解度降低而析出,並與鋼中的Si、Al、Zr等元素化合,生成SiN、AlN 、ZrN等氮化物.少量氮化物能細化鋼的晶粒.氮休物多時,會使鋼的塑性和韌性降低.
2、 氮屬於擴大奧氏體區元素,在鋼中可部分代替鎳的作用,是鉻錳氮不銹鋼中的合金元素,在超低碳不銹鋼中,可代替碳的作用,提高鋼的強度.
O:
1、 鋼液中溶解的FeO 在凝固前溫度降低過程中與鋼液中的碳起反應,生成一氧化碳氣泡,在鑄件中造成氣孔.
2、 鋼液凝固過程中,FeO因溶解度下降而析出在鋼的晶粒周界處,降低鋼的性能.
㈥ 用lipo2000轉染4h後的換液需要pbs洗嗎
那就要看實驗要求嚴不嚴了。 需要將細胞用作他途，比如拿去做轉染、提蛋白等，這就需要將細胞用PBS清洗，但也不是必須，得看情況。一般細胞換液，可以不用PBS清洗。
㈦ 磷酸鈣法轉染和LIPO2000一樣嗎，
這是兩種轉染方法
磷酸鈣法：原理是形成磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞；
LIPO2000：實質是陽離子脂質體法，原理是帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞
㈧ 轉染試劑lipo2000和oligo有什麼區別
oligo的轉染還是屬於DNA轉染，由於分子小，轉染的問題主要是轉染後的穩定性。
脂質體的轉染毒性是最大的，很明顯，那麼多的細胞死亡是由於轉染的細胞毒性導致的。對於這一點我有兩個建議，一個是減少DNA的用量，我一般做轉染，對於任何細胞，只要是24孔板，一般都是用1ugDNA，這個量絕對夠了,設置RFCET2ul,3ul,4ul三個梯度，每個梯度最好做2個復孔,DNA 和RFECT的比例是1:2-1:3，因為質粒轉染進入細胞的本質，和病毒感染沒區別，質粒的各種元件會從宿主細胞內搶奪細胞機器大量開始轉錄翻譯你的目的蛋白，在這個過程中會產生大量的沒有正確折疊蛋白
㈨ 10cm細胞培養皿可以做siRNA干擾嗎，需要多大量的siRNA和lipo 2000呢
當然可以啊，要多少lipo2000是根據細胞種類來看的，有些細胞對lipo2000毒性的耐受力差，就不能多用。我知道的HEK 293細胞一般可以用到30ul的lipo2000，而siRNA的用量一般是1ug/1ul lipo2000.
㈩ 請教，關於lipo2000轉染效率低下的原因探討
脂質體的轉染毒性是最大的，很明顯，那麼多的細胞死亡是由於轉染的細胞毒性導致的。對於這一點我有兩個建議，一個是減少DNA的用量，我一般做轉染，對於任何細胞，只要是12孔板，一般都是用1ugDNA，這個量絕對夠了。,因為質粒轉染進入細胞的本質，和病毒感染沒區別，質粒的各種元件會從宿主細胞內搶奪細胞機器大量開始轉錄翻譯你的目的蛋白，在這個過程中會產生大量的沒有正確折疊蛋白，這些異常折疊蛋白進一步引起ER stress導致細胞凋亡。因此你用DNA太多，本身就有細胞毒性。另外就是脂質體本身的毒性。事實上，對於293系的細胞系，最好用的是PEI這種東西。毒性小，轉染效率高，一般對293系列的細胞系可以輕易達到80%。polyscience有粉末買，買回來後直接在分子純度的水裡配置成1ug/uL的溶液，和你的質粒按照1ug DNA/6ug PEI對293進行轉染。
而且直接使用自製的PEI非常便宜，在293上遠比商品化的脂質體要好。
另外，如果你們實驗室確實錢多，不怕花錢，建議你取用Promega的FugenHD,那個轉染效率比脂質體更好，而且毒性小，至於價格。。。。。。。。。。。也更高。。。。。。。。。
另外，你說漂浮的細胞有表到GFP，那個不一定是真的GFP，很多時候