葯敏紙片有效期

Ⅰ 葯物敏感試驗的葯物敏感試驗的方法

測定細菌對抗菌葯物敏感性的試驗稱為葯物敏感試驗或簡稱葯敏試驗。由於養雞業中抗菌葯物的廣泛使用，導致抗葯菌株越來越多，盲目用葯常常效果不佳。因此，進行葯物敏感試驗已成為正確使用抗菌葯物的必要手段。葯物敏感試驗的方法有多種，如紙片擴散法、試管法、挖洞法等。其中，紙片擴散法簡便易行，出結果快，是目前生產中最常見的方法，現將該種方法介紹如下：

（1）葯敏紙片的准備

常用抗菌葯敏紙片已有商品供應，一般可以買到，可直接利用。

（2）葯敏培養基的制備

①普通肉湯瓊脂：又稱營養瓊脂。蛋白腖10克、氯化鈉（NaCl）15克、磷酸氫二鉀（K₂HPO₄）1克、瓊脂20克、牛肉浸出液1000毫升（可用牛肉浸膏10克浸於1000毫升蒸餾水代替）。

牛肉浸出液的配製方法：取瘦牛肉去掉脂肪、腱膜等，絞碎或切碎，按500克牛肉加1000毫升蒸餾水混合，置4℃冰箱內過夜，取出後加熱到80～90℃，經1小時後，以數層紗布濾除肉渣並擠出肉水，再用脫脂棉過濾，量其體積並用蒸餾水補足1000毫升，分裝後20分鍾高壓蒸汽滅菌，即製成牛肉浸出液。

將以上其他成分加入到牛肉浸出液中，加熱溶解，冷卻後調pH至7.6，煮沸10分鍾，用濾紙過濾後分裝，再以10.4萬帕高壓蒸汽滅菌25分鍾，取出後冷卻至55℃左右，在90毫升直徑滅菌的平皿上傾注成4毫米厚的平板。做好的平板，密封包裝後可在冰箱中保存2～3周。使用前應將平皿置37℃溫箱中培養24小時，確認無菌後再用於試驗。

②鮮血瓊脂：將滅菌的營養瓊脂加熱融化，至45～50℃時加入無菌鮮血5%（每100毫升營養瓊脂中加入鮮血5～6毫升）傾注平皿。無菌鮮血，用無菌手術取健康動物（綿羊或家兔等）的血液，加入盛有無菌5%檸檬酸鈉溶液的容器中（血與5%檸檬酸鈉的比例為9∶1）混勻，置冰箱中保存備用。

（3）試驗方法

臨床上分離到的細菌進行純培養。用滅菌的接種環挑取被檢菌的純培養物劃線或塗布於平板上，並盡可能使其密而均勻。用滅菌鑷子將葯敏紙片平放於平板上並輕壓使其緊貼平板。直徑9.0厘米的平皿可貼7張紙片，紙片間距不少於24毫米，紙片與平皿邊緣距離不少於15毫米。貼好後將平板底部朝上置於37℃溫箱中培養24小時，取出觀察結果。

（4）結果判定

凡對被檢菌有抑制力的抗菌葯物，由於向周圍擴散，抑制細菌的生長，故在紙片周圍出現一個無細菌生長的圓圈，稱為抑菌圈。抑菌圈越大，說明該菌對此種葯物敏感度越高，反之越低。如果無抑菌圈，則說明該菌對此種葯物具有耐葯性。所以，判定結果時，以抑菌圈直徑的大小來作為細菌對該葯物敏感度高低的標准。

一般來說，抑菌圈直徑70毫米以上為極度敏感，15～20毫米為高度敏感，10～15毫米為中度敏感，10毫米以下為低敏感，無抑菌圈為不敏感。對多黏菌素的作用，抑菌圈在10毫米以上者為高度敏感，6～9毫米為低度敏感。

經葯敏試驗後，應該選擇極度敏感或高度敏感的葯物進行治療。

Ⅱ 紙片葯敏實驗操作時應注意什麼

⑴配抗菌葯物原液前要清楚抗菌葯物原粉的百分含量、批號和生產廠家。
⑵配製抗菌葯物原液時，可能會遇到抗菌葯物難溶的現象，這就要求用相應的助溶劑溶解。
⑶抗菌葯物原液的終體積要用容量瓶定容。
⑷單位的換算（如 強力黴素，含量887IU/mg，計算配製1280mg/mL 的強力黴素50毫升，需要多少克強力黴素原粉？）
抗生素的效價通常以重量或國際單位（IU)來表示。
青黴鈉1mg=1667 IU或1 IU＝0.6 mg
青黴素鉀1mg=1559 IU或1 IU＝0.625 mg
制黴菌素1mg=3700 IU
其他抗生素多以重量為單位或1mg=1000 IU
⑸抗菌葯物原液的終濃度可增大到5120mg/mL，這可縮減加入紙片中的抗菌葯物原液的體積。
⑹根據標准，有時要求紙片的抗菌葯物含量較低，加入的抗菌葯物原液的量過少，不足以將50片紙片全部潤濕時，應將抗菌葯物原液用相應的滅菌PBS稀釋到0.5mL，混勻後再加入西林瓶內。
⑺製作紙片時，要多做幾份進行高壓，以備試驗失敗重做時，節約時間。
⑻葯敏紙片在37℃烘乾，可能需要一到兩天的時間，切勿將紙片放入高溫中烘乾，以防葯物失效。
⑼密封紙片後，可放入4冰箱保存或置陰暗乾燥處保存，切勿受潮。

Ⅲ 做葯敏試驗需要什麼

葯敏試驗根據美國臨床標准委員會（NCCLS）推薦的K-B瓊脂法進行，葯敏紙片選擇中國生物製品鑒定所葯敏紙片，試驗所選擇葯物必須包括下列抗生素：氨苄西林（AMP），阿莫西林/克拉維酸（AMC），頭孢噻吩（CFT），頭孢噻肟（CTX），慶大黴素（GEN），萘啶酸（NAL），環丙沙星（CIP），四環素（TBT），利福平（RFA），復方新諾明（SMZ）。葯敏結果判定標准按照NCCLs手冊2005版。
1.
操作方法：
（1）將待檢菌接種於普通營養瓊脂平板，37℃培養16～18小時，然後挑取普通營養瓊脂平板上的純培養菌落，懸於3ml生理鹽水中，混勻後與菌液比濁管比濁。以有黑字的白紙為背景，調整濁度與比濁管（0.5麥氏單位）相同。
（2）用無菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上擠壓去掉多餘菌液。用棉拭子塗布整個M-H培養基表面，反復幾次，每次將平板旋轉60度，最後沿周邊繞兩圈，保證塗均勻。
（3）待平板上的水分被瓊脂完全吸收後再貼紙片。用無菌鑷子取葯敏紙片貼在平板表面，紙片一貼就不可再拿起。每個平板貼5張紙片，每張紙片間距不少於24mm，紙片中心距平皿邊緣不少於15mm。在菌接種後15分鍾內貼完紙片。
（4）將平板反轉，孵育18～24小時後取出，用游標卡尺測量抑菌圈直徑，從平板背面測量最接近的整數毫米數並記錄（附表6）。抑菌環的邊緣以肉眼見不到細菌明顯生長為限。有的菌株可出現蔓延生長，進入抑菌環，磺胺葯在抑菌環內出現輕微生長，這些都不作為抑菌環的邊緣。結果判斷依據鑒定所葯敏紙片判定標准。
（5）每次葯敏試驗必須用ATCC
25922大腸桿菌做質控。只有當質控菌株的抑菌圈直徑在允許范圍內測試菌株的結果才可以報告。ATCC
25922的結果必須與測試菌株同時記錄和報告在附表6中。
0.5麥氏比濁管配製方法：
0.048M
BaCL2
(1.17%
W/V
BaCL2
.
2H2O)
0.5ml
0.36N
H2SO4
(1%,
V/V)
99.5ml
將二液混合，置螺口試管中，放室溫暗處保存。用前混勻。有效期為6個月。
2.
注意事項：
(1)
制備MH瓊脂平板應用直徑90mm平皿，在水平的實驗台上傾注。瓊脂厚為4±0.5mm（約25-30ml培養基），瓊脂凝固後塑料包裝放4℃保存，在5
日內用完，使用前應在37℃培養箱烤乾平皿表面水滴。傾注平皿前應用pH計測pH值是否正確(pH應為7.3)。pH過低會導致氨基糖苷類，大環內酯類失效，而青黴素活力增強。
(2)
葯敏紙片長期儲存應於－20℃，日常使用的小量紙片可放在4℃，但應至於含乾燥劑的密封容器內。使用時從低溫取出後,放置平衡到室溫後才可打開，用完後應立即將紙片放回冰箱內的密封容器內。
過期紙片不能使用,
應棄去。
(3)
不穩定葯物如亞胺培南,
頭孢克洛,
克拉維酸復合葯等,
應冷凍保存,
最好在-40
℃以下。
(4)
保證質控菌株不變異的簡便方法，將新得到的凍干菌株接種含血的M-H平板復活。然後每株細菌接種10支高層瓊脂管，放置冰箱保存。每月取出一支，傳出細菌供常規用。待用剩至最後一支，可傳種在M-H平板上，再接種一批高層瓊脂管備用。如此可保證原始菌種永不接觸抗菌素。
3.質量控制
質量控制方法
是用與常規實驗相同的操作方法，測定質控菌株的抑菌環。應使用新鮮傳代的菌種。接種菌液的塗布方法等均同常規操作，測定的抗菌素種類也應與常規測定的種類相同。

Ⅳ 葯敏紙片上的字都代表什麼的

抗生素葯敏紙片中英文對照表裡面的解釋非常詳細和專業，希望可以對你有所幫助。

Ⅳ 注射用鹽酸多西環素凍乾的材料與方法

病例選擇
(1)納入標准年齡18～65歲的住院或門診患者；性別不限；經臨床和實驗室確診的急性輕或中度細菌感染；試驗前72h內未用過其它抗菌葯物或用後確證無效者(有臨床表現，且必須細菌培養仍陽性)；自願受試並簽署知情同意書者。
(2)排除標准對大環內酯類、四環素類葯物有過敏史，或有過敏性疾患史者；嚴重心肝、腎功能不全或血液系統疾病及其他嚴重基礎疾病患者；妊娠期及哺乳期婦女；有精神、神經系統疾患以及晚期腫瘤患者；依從性差或病情嚴重不能完成療程者。
葯品、劑量和療程
(1)葯品試驗葯注射用鹽酸多西環素凍乾粉劑(每支100mg，批號20040712)和對照葯注射用阿奇黴素凍乾粉劑(每支250mg，批號040792)均由海口奇力制葯有限公司提供，有效期2年。
(2)劑量與療程兩組均每次靜脈滴注2支(試驗葯0.2g；對照葯0.5g)，qd，療程均為5～12d。
觀察指標
(1)臨床觀察試驗期間詳細觀察患者症狀、體征變化，並按觀察表要求准確記錄。
(2)實驗室及輔助檢查給葯前及療程結束時查血、尿常規，肝、腎功能及血電解質；療程前後各做一次細菌培養和心電圖，下呼吸道感染患者療程前後行x線胸片各一次。治療後實驗室檢查異常者，須隨防至恢復治療前水平。採用KB法測定分離細菌對米諾環素、阿奇黴素、多西環素、阿米卡星、頭孢噻肟、左氧氟沙星的敏感性。用瓊脂稀釋法測定以上6種抗生素MIC值，葯敏紙片由美國BD公司生產，葯敏試驗結果、MIC結果判定標准由中國葯品生物製品檢定所提供。實驗中密切觀察不良事件，並記錄發生時間、表現、程度、處理及轉歸，按肯定有關、很可能有關、可能有關、可能無關、肯定無關5級標准判斷其與臨床試驗葯物的因果關系。
療效判斷標准
按痊癒、顯效、進步、無效4級評定臨床療效。按清除、部分清除、未清除、替換、再感染5級標准評價細菌學療效。
資料處理與統計分析
所有臨床病例資料經審核後，由專業統計分析人員輸入計算機，用SAS統計軟體包進行相應統計處理與分析(計量資料採用t檢驗，計數資料採用χ2檢驗)，得出兩組各項指標差異是否有顯著性(所有假設檢驗的檢驗水準均為α=0.05)。

Ⅵ 葯敏紙片最後測直徑的時候算不算紙片本身直徑

不用減葯敏紙片的直徑，應該算50mm，葯敏結果判斷有標準的，可以網上搜搜。其實你想想就明白了，抑菌圈直徑是指葯物抑制細菌生長所出現的一個圈，紙片下面的細菌也被抑制了，所以也應該是抑菌圈直徑的一部分。

Ⅶ 氟苯尼考葯敏紙片，氟苯尼考葯敏紙片哪裡便宜

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Ⅷ 動物葯敏試驗中葯物不敏感的原因有那些

獸醫臨床中的葯敏試驗
目前由各種細菌所引起的疾病給畜禽養殖業帶來嚴重經濟損失，阻礙了養殖業的快速發展，所以使用抗菌葯預防和治療細菌性疾病成了畜禽養殖過程中的一項重要工作。但由於養殖過程中不科學的、盲目的濫用抗菌葯，細菌的耐葯性問題正變得越來越突出，不少耐葯菌株可耐受多種抗生素。由此而造成的危害十分嚴重，它不僅使抗菌葯的療效降低，療程延長，死亡率升高和治療費用增加。這不僅給養殖業帶來巨大的經濟損失，而且葯菌株可能會將耐葯性基因由動物轉移給人類，對人類健康也造成潛在威脅。因此，臨床上應合理應用抗菌葯，以避免或減少耐葯性的產生，而合理應用抗菌葯控制畜禽疾病的一項重要內容就是通過葯敏試驗指導臨床用葯，以充分發揮抗菌葯療效，並盡可能減少其不良影響。
一、什麼是葯敏試驗？
抗菌葯物敏感性試驗，簡稱葯敏試驗，是指對敏感性不能預測的分離菌株進行試驗，測試抗菌葯在體外對病原微生物有無抑製作用，以指導選擇治療葯物和了解區域內常見病原菌耐葯性變遷，有助於經驗性治療選葯。葯敏試驗是獸醫臨床工作中的一項基本技能，也是使用抗菌葯物治療前必不可少的一道環節。

二、葯敏試驗的意義
1、可以相對快速有效地檢測病原菌對各種抗菌葯的敏感性，指導臨床合理用葯。因為實驗是在體外對已經分離的細菌進行葯敏，不需要生物載體，不需要實驗動物，操作相對簡單，成本相對降低。是一種既經濟又有效的方法。
2、可以對流行病學調查進行監控，控制和預防耐葯菌株的流行。因為隨著新型致病菌的不斷出現，各種致病菌對不同的抗菌葯的敏感性不同，同一細菌的不同菌株對不同抗菌葯的敏感性也有差異。進行有效的葯敏試驗可以及時掌握各種新型菌種和菌株的耐葯性，對流行病學調查建立監控，同時採取相應的措施也就可以控制和預防耐葯菌株的流行。
3、為臨床用葯提供參考依據。因為一個正確的葯敏試驗結果，可作為臨床獸醫和畜禽養殖者選用有效抗菌葯的參考。長期以來，由於各種致病菌耐葯性的產生使各種常用抗菌葯葯效下降或消失。不能很好的掌握葯物對細菌的敏感程度，不但造成葯物浪費，而且還延誤病情，給養殖戶造成了很大的經濟損失。近十幾年，在肉雞生產中，為了控制大腸桿菌及某些細菌感染，一些抗菌葯物的盲目使用，導致耐葯菌株越來越多。根據已進行的大量葯敏試驗結果，大腸桿菌、沙門氏菌對曾經敏感的氨基糖苷類、氟喹諾酮類等，均產生了不同程度的耐葯性，經常發現對十幾種常用抗菌葯都不敏感的菌株。這是一個非常危險的信號。所以在臨床疾病防治工作中，要取得較好的治療效果，應擴大常規抗菌葯種類進行葯敏試驗，根據葯敏試驗結果，選擇敏感葯物，且應注意交替用葯，按療程投葯，這樣才能收到較好的治療效果。

三、常用的葯敏試驗方法
獸醫臨床常用的葯敏試驗方法主要有兩種，即擴散法和稀釋法。其中擴散法屬手工測試方法，通過測試葯物紙片或者牛津杯在固體培養基上的抑菌圈的大小，判斷細菌對該種葯物是否敏感。稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法，通過測試細菌在含不同濃度葯物培養基內的生長情況，判斷其最低抑菌濃度（MIC）。
由於擴散法操作簡單，成本低，已經被大多數實驗室和基層單位所採用。擴散法又包括紙片法、牛津杯法和打孔法，目前牛津杯法和打孔法在獸醫臨床已較少應用。以下簡單介紹紙片法。
1、葯敏紙片的製作
紙片法中使用的葯敏紙片目前市場上已有較多廠家的產品銷售。但也可根據需要自製，具體自製的方法如下：
取質量較好的定性濾紙，用普通的打孔器打成直徑6mm的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔乾燥的小瓶或小平皿中，以單層牛皮紙扎口或包紮。經15磅15-20分鍾高壓滅菌後，置於37℃溫箱或烘箱中數天，使完全乾燥。按每張紙片飽和吸水量為0.01ml計，在上述含有50片紙片的小瓶內加入葯液0.5ml，不時翻動，使濾紙片將葯液均勻吸凈，一般浸泡30分鍾即可。同時在記錄葯物名稱，於37℃溫箱過夜。在溫箱或烘箱中的時間不宜過長，以免某些抗生素失效。青黴素、金黴素宜在低溫下真空乾燥。乾燥後即密封。切勿受潮，置陰暗乾燥處或家用冰箱中保存，有效期4-6個月。

2、葯液的制備
自製葯敏紙片時還需自行配製抗菌葯液。抗菌葯的稀釋劑通常用蒸餾水。一般可按商品葯使用說明書上的配料或飲水濃度，按1g需加多少毫升水或配多少毫克飼料，就相當於配製葯液所加蒸餾水的毫升數。如10g葯物可配50kg飼料，其換算方法為：1g本品加5000ml蒸餾水。此溶液液即為用於做葯敏試驗的葯液。

3、試驗操作方法
在超凈工作台中或酒精燈旁，用無菌棉簽或經酒精燈火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將菌液均勻塗布到平皿中的固體培養基表面。然後用無菌鑷子將紙片放於固體培養基表面並輕壓，使紙片與培養基表面完全接觸。為了能准確觀察結果，要求葯敏紙片均勻分布於培養基上，位置安排適中，防止出現抑制圈重疊。一般各紙片中心相距應大於24mm，可在平皿中央貼一片，外周等距離貼5－6片。記住每種葯敏紙片的名稱。貼完紙片的平皿15分鍾後再置於37℃溫箱中培養16－24小時，觀察記錄結果。以葯敏紙片周圍沒有肉眼可見生長物區域為抑菌圈，根據抑菌圈直徑大小判斷細菌對抗菌葯的敏感性。
葯敏試驗結果判定標准
抑菌圈直徑（毫米）敏感性
＞20極敏感
15-20高敏感
10-14中敏感
＜10低敏感
0不敏感
實踐證明，利用自製葯敏紙片進行葯敏試驗，可以靈活選葯，與某病菌相關的葯物均可隨時製作葯敏紙片用於治療。可在本場葯品范圍內或本地區容易買到的葯品中選出最敏感的葯物。還可在短時間內選擇最佳葯品和最佳劑量，既能縮短病程，又能避免盲目用葯，減少浪費。
四、根據葯敏試驗選葯原則
完成葯敏試驗後，應根據結果選擇敏感性較高，同時價廉、易得、安全的葯物進行治療，以減少耐葯菌株，同時還應注意以下原則：
1、在選擇高敏葯物時還應考慮葯物的吸收途徑。因為葯敏試驗是葯液直接和細菌接觸，而在給畜禽用葯時，必須通過機體的吸收才能使葯物發揮療效，所以在給畜禽用葯時，高敏葯物一定要配合適宜的給葯方法，並予以足夠劑量、足夠療程，才會取得好的治療效果。
2、葯敏試驗結果僅為臨床選擇高敏葯物的參考。因動物機體及環境等因素影響，葯物的葯敏試驗與臨床治療效果的符合率一般為70－80%，所以也不能過分地依賴葯敏試驗。如發現療效不顯著應及時換葯。
3、葯敏試驗確定的首選葯物不是一成不變。隨著葯物使用頻率的增加及新特葯的不斷出現，細菌對原先的高敏感葯物可能不再敏感。因此，定期進行葯敏試驗了解本場細菌對抗菌葯的敏感性情況是很有必要的。
4、窄譜抗生素能解決的問題不選廣譜抗生素，一種抗生素可達到治療作用時，不要用兩種葯物聯合應用。必須應用兩種抗生素時，應選擇聯合應用具有協同作用的葯物。
5、避開已經使用過的葯物或其同類葯物，發病期間已用過的葯物或同類葯物一般不用。

四、影響葯敏試驗結果的因素
在以紙片法進行葯敏試驗時，以下幾方面因素可影響試驗的結果：
1、培養基：首先應根據試驗菌的營養需要選擇適宜的培養基。培養基的成分的不同，不僅影響敏感菌株的生長繁殖並可影響到抑制圈的直徑。一般細菌，如大腸桿菌及葡萄球菌可使用普通營養瓊脂；做磺胺類葯物敏感試驗時應選用無蛋白腖平板；鏈球菌和巴氏桿菌可用綿羊血瓊脂平板。其次，傾注平板時，厚度應合適（約5-6mm），不可太薄，一般90mm直徑的培養皿，傾注培養基18-20ml為宜。培養基內應盡量避免有抗菌葯物的拮抗物質，如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和對氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺葯和TMP的活性。
2、細菌接種量：細菌接種量應恆定，如太多，抑菌圈變小，能產酶的菌株更可破壞葯物的抗菌活性。
3、葯物濃度：葯物的濃度和總量直接影響抑菌試驗的結果，需精確配製。商品葯應嚴格按照其推薦治療量配製。
4、培養時間：一般細菌培養溫度和時間為37℃ 12-24小時，有些抗菌葯擴散慢如多粘菌素，可將已放好葯敏紙片的培養基先置4℃冰箱內2-4小時，使抗菌葯預擴散，然後再放37℃溫箱中培養，可以推遲細菌的生長，而得到較明顯的抑菌圈。

五、葯敏試驗存在的問題
當前進行葯敏試驗仍然存在一些問題，主要包括以下幾方面：
1、方法學不統一，沒有標准化。
2、市場提供的葯敏試驗的培養基、葯敏紙片等缺乏嚴格質控，質量難以保證。所以還是建議按要求自製葯敏紙片。

獸醫臨床中的葯敏試驗

獸醫臨床中的葯敏試驗
目前由各種細菌所引起的疾病給畜禽養殖業帶來嚴重經濟損失，阻礙了養殖業的快速發展，所以使用抗菌葯預防和治療細菌性疾病成了畜禽養殖過程中的一項重要工作。但由於養殖過程中不科學的、盲目的濫用抗菌葯，細菌的耐葯性問題正變得越來越突出，不少耐葯菌株可耐受多種抗生素。由此而造成的危害十分嚴重，它不僅使抗菌葯的療效降低，療程延長，死亡率升高和治療費用增加。這不僅給養殖業帶來巨大的經濟損失，而且耐葯菌株可能會將耐葯性基因由動物轉移給人類，對人類健康也造成潛在威脅。因此，臨床上應合理應用抗菌葯，以避免或減少耐葯性的產生，而合理應用抗菌葯控制畜禽疾病的一項重要內容就是通過葯敏試驗指導臨床用葯，以充分發揮抗菌葯療效，並盡可能減少其不良影響。
一、什麼是葯敏試驗？
抗菌葯物敏感性試驗（antimicrobial susceptibility test，AST），簡稱葯敏試驗，是指對敏感性不能預測的分離菌株進行試驗，測試抗菌葯在體外對病原微生物有無抑製作用，以指導選擇治療葯物和了解區域內常見病原菌耐葯性變遷，有助於經驗性治療選葯。葯敏試驗是獸醫臨床工作中的一項基本技能，也是使用抗菌葯物治療前必不可少的一道環節。

二、葯敏試驗的意義
1、可以相對快速有效地檢測病原菌對各種抗菌葯的敏感性，指導臨床合理用葯。因為實驗是在體外對已經分離的細菌進行葯敏，不需要生物載體，不需要實驗動物，操作相對簡單，成本相對降低。是一種既經濟又有效的方法。
2、可以對流行病學調查進行監控，控制和預防耐葯菌株的流行。因為隨著新型致病菌的不斷出現，各種致病菌對不同的抗菌葯的敏感性不同，同一細菌的不同菌株對不同抗菌葯的敏感性也有差異。進行有效的葯敏試驗可以及時掌握各種新型菌種和菌株的耐葯性，對流行病學調查建立監控，同時採取相應的措施也就可以控制和預防耐葯菌株的流行。
3、為臨床用葯提供參考依據。因為一個正確的葯敏試驗結果，可作為臨床獸醫和畜禽養殖者選用有效抗菌葯的參考。長期以來，由於各種致病菌耐葯性的產生使各種常用抗菌葯葯效下降或消失。不能很好的掌握葯物對細菌的敏感程度，不但造成葯物浪費，而且還延誤病情，給養殖戶造成了很大的經濟損失。近十幾年，在肉雞生產中，為了控制大腸桿菌及某些細菌感染，一些抗菌葯物的盲目使用，導致耐葯菌株越來越多。根據已進行的大量葯敏試驗結果，大腸桿菌、沙門氏菌對曾經敏感的氨基糖苷類、氟喹諾酮類等，均產生了不同程度的耐葯性，經常發現對十幾種常用抗菌葯都不敏感的菌株。這是一個非常危險的信號。所以在臨床疾病防治工作中，要取得較好的治療效果，應擴大常規抗菌葯種類進行葯敏試驗，根據葯敏試驗結果，選擇敏感葯物，且應注意交替用葯，按療程投葯，這樣才能收到較好的治療效果。

三、常用的葯敏試驗方法
獸醫臨床常用的葯敏試驗方法主要有兩種，即擴散法和稀釋法。其中擴散法屬手工測試方法，通過測試葯物紙片或者牛津杯在固體培養基上的抑菌圈的大小，判斷細菌對該種葯物是否敏感。稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法，通過測試細菌在含不同濃度葯物培養基內的生長情況，判斷其最低抑菌濃度（MIC）。
由於擴散法操作簡單，成本低，已經被大多數實驗室和基層單位所採用。擴散法又包括紙片法、牛津杯法和打孔法，目前牛津杯法和打孔法在獸醫臨床已較少應用。以下簡單介紹紙片法。

1、葯敏紙片的製作
紙片法中使用的葯敏紙片目前市場上已有較多廠家的產品銷售。但也可根據需要自製，具體自製的方法如下：
取質量較好的定性濾紙，用普通的打孔器打成直徑6mm的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔乾燥的小瓶或小平皿中，以單層牛皮紙扎口或包紮。經15磅15-20分鍾高壓滅菌後，置於37℃溫箱或烘箱中數天，使完全乾燥。按每張紙片飽和吸水量為0.01ml計，在上述含有50片紙片的小瓶內加入葯液0.5ml，不時翻動，使濾紙片將葯液均勻吸凈，一般浸泡30分鍾即可。同時在記錄葯物名稱，於37℃溫箱過夜。在溫箱或烘箱中的時間不宜過長，以免某些抗生素失效。青黴素、金黴素宜在低溫下真空乾燥。乾燥後即密封。切勿受潮，置陰暗乾燥處或家用冰箱中保存，有效期4-6個月。

2、葯液的制備
自製葯敏紙片時還需自行配製抗菌葯液。抗菌葯的稀釋劑通常用蒸餾水。一般可按商品葯使用說明書上的配料或飲水濃度，按1g需加多少毫升水或配多少毫克飼料，就相當於配製葯液所加蒸餾水的毫升數。如10g葯物可配50kg飼料，其換算方法為：1g本品加5000ml蒸餾水。此溶液液即為用於做葯敏試驗的葯液。

3、試驗操作方法
在超凈工作台中或酒精燈旁，用無菌棉簽或經酒精燈火焰滅菌的接種環挑取適量細菌培養物，以劃線方式將菌液均勻塗布到平皿中的固體培養基表面。然後用無菌鑷子將紙片放於固體培養基表面並輕壓，使紙片與培養基表面完全接觸。為了能准確觀察結果，要求葯敏紙片均勻分布於培養基上，位置安排適中，防止出現抑制圈重疊。一般各紙片中心相距應大於24mm，可在平皿中央貼一片，外周等距離貼5－6片。記住每種葯敏紙片的名稱。貼完紙片的平皿15分鍾後再置於37℃溫箱中培養16－24小時，觀察記錄結果。以葯敏紙片周圍沒有肉眼可見生長物區域為抑菌圈，根據抑菌圈直徑大小判斷細菌對抗菌葯的敏感性。
葯敏試驗結果判定標准
抑菌圈直徑（毫米）敏感性
＞20極敏感
15-20高敏感
10-14中敏感
＜10低敏感
0不敏感
實踐證明，利用自製葯敏紙片進行葯敏試驗，可以靈活選葯，與某病菌相關的葯物均可隨時製作葯敏紙片用於治療。可在本場葯品范圍內或本地區容易買到的葯品中選出最敏感的葯物。還可在短時間內選擇最佳葯品和最佳劑量，既能縮短病程，又能避免盲目用葯，減少浪費。

四、根據葯敏試驗選葯原則
完成葯敏試驗後，應根據結果選擇敏感性較高，同時價廉、易得、安全的葯物進行治療，以減少耐葯菌株，同時還應注意以下原則：
1、在選擇高敏葯物時還應考慮葯物的吸收途徑。因為葯敏試驗是葯液直接和細菌接觸，而在給畜禽用葯時，必須通過機體的吸收才能使葯物發揮療效，所以在給畜禽用葯時，高敏葯物一定要配合適宜的給葯方法，並予以足夠劑量、足夠療程，才會取得好的治療效果。
2、葯敏試驗結果僅為臨床選擇高敏葯物的參考。因動物機體及環境等因素影響，葯物的葯敏試驗與臨床治療效果的符合率一般為70－80%，所以也不能過分地依賴葯敏試驗。如發現療效不顯著應及時換葯。
3、葯敏試驗確定的首選葯物不是一成不變。隨著葯物使用頻率的增加及新特葯的不斷出現，細菌對原先的高敏感葯物可能不再敏感。因此，定期進行葯敏試驗了解本場細菌對抗菌葯的敏感性情況是很有必要的。
4、窄譜抗生素能解決的問題不選廣譜抗生素，一種抗生素可達到治療作用時，不要用兩種葯物聯合應用。必須應用兩種抗生素時，應選擇聯合應用具有協同作用的葯物。
5、避開已經使用過的葯物或其同類葯物，發病期間已用過的葯物或同類葯物一般不用。

四、影響葯敏試驗結果的因素
在以紙片法進行葯敏試驗時，以下幾方面因素可影響試驗的結果：
1、培養基：首先應根據試驗菌的營養需要選擇適宜的培養基。培養基的成分的不同，不僅影響敏感菌株的生長繁殖並可影響到抑制圈的直徑。一般細菌，如大腸桿菌及葡萄球菌可使用普通營養瓊脂；做磺胺類葯物敏感試驗時應選用無蛋白腖平板；鏈球菌和巴氏桿菌可用綿羊血瓊脂平板。其次，傾注平板時，厚度應合適（約5-6mm），不可太薄，一般90mm直徑的培養皿，傾注培養基18-20ml為宜。培養基內應盡量避免有抗菌葯物的拮抗物質，如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和對氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺葯和TMP的活性。
2、細菌接種量：細菌接種量應恆定，如太多，抑菌圈變小，能產酶的菌株更可破壞葯物的抗菌活性。
3、葯物濃度：葯物的濃度和總量直接影響抑菌試驗的結果，需精確配製。商品葯應嚴格按照其推薦治療量配製。
4、培養時間：一般細菌培養溫度和時間為37℃ 12-24小時，有些抗菌葯擴散慢如多粘菌素，可將已放好葯敏紙片的培養基先置4℃冰箱內2-4小時，使抗菌葯預擴散，然後再放37℃溫箱中培養，可以推遲細菌的生長，而得到較明顯的抑菌圈。

五、葯敏試驗存在的問題
當前進行葯敏試驗仍然存在一些問題，主要包括以下幾方面：
1、方法學不統一，沒有標准化。
2、市場提供的葯敏試驗的培養基、葯敏紙片等缺乏嚴格質控，質量難以保證。所以還是建議按要求自製葯敏紙片。
3、因需要先進行細菌的分離培養，所以葯敏試驗報告出結果時間長，檢驗與臨床缺乏溝通，對於基層獸醫站或養殖場，葯敏結果不能滿足臨床治療要求，容易延誤治療時機。但根據有關報道，也可進行簡易的葯敏試驗，方法如下：無菌取病死畜禽的部分肝、脾等組織，按1：5加生理鹽水研磨製成懸液，靜置5分鍾，用無菌吸管吸懸液，加兩滴於營養瓊脂板上，塗布均勻，5分鍾後貼上葯敏試紙，培養、觀察抑菌圈大小。
4、對於部分營養需求較高的細菌或微生物，如鏈球菌和支原體，臨床上較難培養，限制了葯敏試驗的應用。
5、部分養殖場或基層獸醫站缺乏做細菌分離培養和葯敏試驗的意識。絕大多數養殖者或技術人員是在沒有明確微生物學診斷的情況下使用抗菌葯物，養殖場規模越小，細菌培養和葯敏試驗做的越少，有的養殖場輪翻使用多種抗菌葯物而不做細菌培養和葯敏試驗，致使療效不佳，治療時機延誤和葯品的浪費。一些病例用葯前不做葯敏試驗，而是在大量使用多種抗菌葯物療效不明顯時才想起做細菌培養和葯敏試驗，而此時細菌已對多種抗菌葯產生耐葯性。

Ⅸ 下列可使紙片擴散法抑菌圈增大的因素有

正確答案:E
解析：葯敏結果的影響因素很多，培養基的酸鹼度以pH值7
.2～7
.4為宜，鹼性可擴大氨基糖苷類的抑菌圈，紙片含葯量是影響抑菌圈大小的主要因素，若保存不當使含葯量下降則導致抑菌圈縮小
。加大菌量可使抑菌圈減小，相反可使抑菌圈擴大
。培養基的厚度對抑菌圈的大小有影響
。MH平板厚度以4mm為宜
。

Ⅹ 影響k-b法葯敏試驗的主要因素有哪些

葯敏試驗的結果受到諸多因素的影響，如培養基、試紙片以及菌液的濃度等。
1、培養基
細菌葯敏試驗所用的培養基種類較多，多數情況下，採用WHO組織統一要求的M-H培養基，這種培養基中含有的低胸腺嘧啶是與磺胺類葯物競爭的物質，因此進行的葯敏試驗效果較好。此外，還有適量的Ca2+、Mg2+，在培養基中起到觸媒的作用。但是，有些細菌對培養基中的成分有特殊的要求，特殊的菌要用特殊的培養基才能進行葯敏試驗。例如，流感嗜血桿菌的葯敏試驗培養基用HTM瓊脂；淋球菌的葯敏試驗培養基用加5％羊血的巧克力M-H瓊脂；肺炎鏈球菌的葯敏實驗用M-H瓊脂加5％的脫纖維羊血培養基。培養基中還有適量的Ca2+、Mg2+，在培養基中起到溶酶的作用，其含量的變化，可影響氨基糖苷類和四環素對銅綠假單胞菌的試驗結果，含量過高，抑菌圈會變小，含量過低，抑菌圈會大得不可接受。
細菌葯敏試驗的培養基厚度大約為4mm，若培養基厚度大於4mm，會使細菌出現耐葯；若小於4mm，本應耐葯的易出現敏感。所以，試驗時一定不要把葯敏紙片放在中央部位，而應均勻地排布在平皿周圍的培養基上。製作葯敏試驗的培養基用水，主要是Ca2+、Mg2+等礦物質離子，也在很大程度上影響著葯敏試驗的結果。
2、試紙片
試紙片材質的好壞，對葯物穩定性和活性有很大影響。加工葯敏試紙片的試紙一般是使用加厚型的濾紙，雜質少，對葯物保存無太大影響。然而，臨床中很多用的是普通紙，被水浸潤後會呈鹼性，並且含有大量無機離子，因此使用普通紙加工的試紙片葯物有較大的影響。葯敏紙片的PH值一般要求為中性，這樣才適合葯的活度。葯敏紙片的厚度要求大約1mm，這樣才有利於細菌的生長和葯物的擴散速度。葯敏紙片的直徑在6.00～6.35mm之間，紙片的厚度和直徑大小都會影響葯敏試驗的結果。
含葯紙片的片間差和質量好壞是做葯敏試驗的關鍵。一些葯敏紙片買來時就有抑菌環偏大或偏小的問題，紙片之間又存在很大的片間差。因此，紙片在用前必須檢驗其片間差和准確度，只有都達到標准要求後才能使用。同時要注意紙片的保存，因為有的紙片，如青黴素類，在保存中因為受潮濕環境的影響容易降低其葯物的活性。因此，紙片應放低溫下(-10℃)保存，同時要避免潮濕，以保持抗菌葯物的活性。盛紙片小瓶自低溫處取出應在室溫平衡至少10min後再打開，避免冷凝水影響葯效。
3、細菌
由於各種菌對葯物的敏感性不同，產生的抑菌環大小不同，如果菌種不純，試驗中所產生的抑菌環大小與該菌種在純培養狀態下產生的抑菌環大小存在較大的差異，影響判斷結果的准確性。因此需要對各種致病菌提純後，分別進行不同的葯敏試驗。葯敏試驗時，需要將提純後的菌種配製成一定濃度的菌液。WHO組織制定的標準是要求菌液濃度在1．5億/ml左右。若菌液濃度過高，該菌會對所有葯物產生耐葯；反之，菌液濃度過低，該菌會對所有葯物均敏感。最精確的方法是使用分光光度計測定新鮮培養物菌懸液的吸光度，來確定菌液濃度。國家細菌耐葯性監測網的三級甲等醫院，其微生物實驗室大多數用此法來確定葯敏試驗的菌液濃度。
葯敏試驗中要將菌液均勻地塗在培養基上，使細菌均勻分布，這樣才能使試驗結果不會出現較大的偏差。塗菌後15min才能貼葯敏紙片。由於塗菌後，細菌要有一段時間的適應過程，但是時間不能過長，否則會使細菌產生耐葯。貼葯敏紙片時，每取一種葯敏紙片必須燒一下鑷子口，避免葯敏紙片之間相互混淆，以提高葯敏的准確性。葯物殺滅細菌存在一定的量比，葯敏試驗培養基上細菌層越厚抑菌圈就越小，反之抑菌圈就越大。根據一種葯物抑菌圈的有無或者大小，只能判斷出該葯對細菌有沒有效果，但其敏感性的高低需要通過科學嚴謹的實驗來確定。葯物的敏感程度需要根據葯敏試驗的結果，並結合以上因素做綜合分析，才能得出科學的結論，而片面地根據葯敏圈的大小來決定敏感與否，結果不夠准確。
綜上所述，造成葯敏試驗的結果可能與實際效果不符，對葯敏試驗要具體情況進行相應的分析，再根據葯物的代謝過程和原理綜合論證，葯敏試驗的指導意義還是很大的。而且上述因素並不是在我們臨床做葯敏試驗過程中都能遇到，對此，我們需要認真執行標准化的試驗方法，認真執行CLSI質控要求，做好室內質控與室間質評，以提高試驗的准確性。嚴格控制葯敏試驗用培養基和葯敏紙片，做到保證質量。